下列是生物學(xué)技術(shù)制備抗體？抗體是由效應(yīng)B細(xì)胞分泌，參與體液免疫．（2）效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，即能分泌特異性抗體，又能無限繁殖，進(jìn)而產(chǎn)生單克隆抗體．（3）③至⑥流程屬于轉(zhuǎn)基因技術(shù)，原理是基因工程．過程⑤基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶．V1基因體外擴增的技術(shù)為（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)），那么，下列是生物學(xué)技術(shù)制備抗體？一起來了解一下吧。
（1）多克隆抗體的制備。
①免疫方法：對多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內(nèi)免疫法、淋巴結(jié)免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產(chǎn)生的抗體比較多；皮內(nèi)免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時特別適用，但與之相對的，它產(chǎn)生的抗體量也不多?；旌厦庖叻ǖ膬?yōu)點是抗原用量小，產(chǎn)生抗體速度快。
②多克隆抗體的制備：將抗原免疫動物（常用的動物為兔、羊、狗等），分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對較低，因此，多克隆抗體在農(nóng)藥殘留速測技術(shù)中的應(yīng)用受到一定的限制。但近年來有學(xué)者恰恰利用了多抗的交叉反應(yīng)高的特點，通過制備出具有某類（或某幾種）農(nóng)藥的“共性結(jié)構(gòu)”的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性”抗體，進(jìn)行農(nóng)藥多殘留分析研究。
（2）單克隆抗體的制備。單克隆抗體制備技術(shù)最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)創(chuàng)立的。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于疾病診斷及生物、醫(yī)學(xué)研究、環(huán)境和食品安全檢測（監(jiān)測）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結(jié)合，有更高的特異性，而且，產(chǎn)生抗體的單克隆細(xì)胞可在體外傳代繁殖，不受動物免疫時間限制生產(chǎn)抗體。
【答案】B
【答案解析】試題分析：
PCR技術(shù)用于擴增核酸，不能用來擴增蛋白質(zhì)；雜交瘤技術(shù)用于制備單克隆抗體；電子顯微鏡用于觀察葉綠體的基粒的亞顯微結(jié)構(gòu)，光學(xué)顯微鏡用于觀察葉綠體的外部形態(tài)；花粉離體培養(yǎng)用于培育單倍體植物。
考點：考查PCR技術(shù)，雜交瘤技術(shù)，顯微鏡的使用，花粉離體培養(yǎng)。
點評：難度較小，熟記技術(shù)的應(yīng)用。
Ⅰ（1）制備單克隆抗體的過程涉及到動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞培養(yǎng)兩個過程，在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，要將動物組織剪碎，用胰蛋白酶處理，使其分散成單個細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液．
（2）誘導(dǎo)融合的細(xì)胞有三種，已免疫B細(xì)胞的自身融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞的自身融合細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞；A細(xì)胞的特點是無限增殖和產(chǎn)生特定抗體，經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞，進(jìn)行體內(nèi)或體外培養(yǎng)．
（3）單克隆抗體的優(yōu)點具有特異性強，靈敏度高，可在體外大量生產(chǎn)．
Ⅱ（1）從母牛體內(nèi)獲得的卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才能與精子受精．
（2）Ⅱ過程優(yōu)質(zhì)奶牛的培育過程需要進(jìn)行胚胎移植，受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．
（3）對Ⅱ中囊胚進(jìn)行胚胎分割移植（或胚胎分割），獲得多頭與此優(yōu)質(zhì)奶牛相同的小牛，注意將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團進(jìn)行均等分割．否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育．
（4）通過顯微注射的生長激素基因等方法導(dǎo)入哺乳動物的受精卵中．若要檢測該受精卵細(xì)胞內(nèi)是否含有基因X，在分子水平上通常用熒光標(biāo)記作探針．
故答案為：
Ⅰ（1）動物細(xì)胞融合胰蛋白酶
（2）無限增殖和產(chǎn)生特定抗體克隆化培養(yǎng)
（3）特異性強，靈敏度高
Ⅱ（1）減數(shù)第二次分裂中期
（2）受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)
（3）胚胎分割移植注意將囊胚的內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行均等分割
（4）顯微注射熒光標(biāo)記的生長激素基因
Ⅰ、（1）向健康人體注射特定抗原，提取出A漿細(xì)胞（效應(yīng)B淋巴細(xì)胞），在人體參與體液免疫．
（2）過程①至②抗體的獲取稱為單克隆抗體，其中①是細(xì)胞融合過程，Y細(xì)胞稱為雜交瘤細(xì)胞．
Ⅱ、（1）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產(chǎn)生平末端；圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534 bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置，從而兩個位點切割后產(chǎn)生的DNA片段的長度分布為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661．
（2）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段．
（3）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進(jìn)行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)．
故答案為：
Ⅰ、（1）、漿細(xì)胞（效應(yīng)B淋巴細(xì)胞）體液
（2）、單克隆抗體細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞
Ⅱ、（1）、537、790、661（寫全給分）
（2）、4
（3）、BamHⅠ
抗體制備技術(shù)對比，雜交瘤與噬菌體展示
雜交瘤技術(shù)，源自體細(xì)胞融合，由克勒與米爾斯坦于1975年發(fā)現(xiàn)。這項技術(shù)通過將骨髓瘤細(xì)胞與免疫動物的脾細(xì)胞融合，生成能分泌特異性高純度單克隆抗體的細(xì)胞。在免疫組化和多種細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)中，雜交瘤技術(shù)發(fā)揮著核心作用。然而，它的長制備過程及對完整抗原表位識別的不足，限制了它的應(yīng)用。
噬菌體展示技術(shù)，運用噬菌體外殼蛋白隨機重組抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因，感染大腸桿菌。噬菌體繁殖、組裝并分泌至培養(yǎng)基中，結(jié)合抗原的噬菌體可被分離、擴增及純化。這種方法能簡便快速篩選大量克隆。在基因工程重組技術(shù)支持下，噬菌體展示技術(shù)在高端抗體應(yīng)用領(lǐng)域成果顯著。
總體而言，噬菌體展示技術(shù)在技術(shù)要求上較高。義翹神州歷經(jīng)多年探索與積累，自主建設(shè)噬菌體抗體庫技術(shù)生產(chǎn)平臺，熟練掌握鼠單抗、兔單抗制備技術(shù)。相比人工免疫與雜交瘤技術(shù)，噬菌體展示技術(shù)避開了細(xì)胞不穩(wěn)定性問題，方法簡單高效，便于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)，篩選容量大，數(shù)周內(nèi)可篩選百萬至億個克隆。它模擬體內(nèi)免疫過程與天然全套抗體庫，可任意克隆抗原抗體，展示出廣泛的應(yīng)用潛力。
噬菌體展示技術(shù)發(fā)展勢頭強勁，其價值不僅限于抗體制備，已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)與蛋白質(zhì)工程。
以上就是下列是生物學(xué)技術(shù)制備抗體的全部內(nèi)容，【答案解析】試題分析：PCR技術(shù)用于擴增核酸，不能用來擴增蛋白質(zhì)；雜交瘤技術(shù)用于制備單克隆抗體；電子顯微鏡用于觀察葉綠體的基粒的亞顯微結(jié)構(gòu)，光學(xué)顯微鏡用于觀察葉綠體的外部形態(tài)；花粉離體培養(yǎng)用于培育單倍體植物?？键c：考查PCR技術(shù)，雜交瘤技術(shù)，顯微鏡的使用，花粉離體培養(yǎng)。點評：難度較小，內(nèi)容來源于互聯(lián)網(wǎng)，信息真?zhèn)涡枳孕斜鎰e。如有侵權(quán)請聯(lián)系刪除。
