目錄生物化學(xué)檢驗仲其軍案例分析答案 生物化學(xué)案例分析題及答案 大一生物化學(xué)案例分析 生物化學(xué)案例分析題目 生物化學(xué)案例教學(xué)
4題：RNA有三種，mRNA也就是信使RNA，作用是把細胞核坦磨稿中游虧的DNA上的遺傳信息帶到細胞質(zhì)中，再和核糖體結(jié)合，按照它攜帶的信息合成蛋白質(zhì)；tRNA也就是轉(zhuǎn)運RNA,是蛋白質(zhì)合成中氨基酸的搬運工；rRNA也就是核糖體RNA,是核讓孝糖體的組成成分。（核糖體由RNA和蛋白質(zhì)組成）
5題：PCR技術(shù)是多聚酶鏈式反應(yīng)的簡寫，是在細胞外進行DNA擴增(DNA的大量迅速復(fù)制)的一項技術(shù)，在基因工程等領(lǐng)域有非常重要的應(yīng)用。
1.8g奶油皂化反應(yīng)用蠢笑衡堿mol量升肢=23.5-9﹚*0.5/1000=0.00725mol
用鉀帶做=0.00725*56=0.406.g
奶油的皂化價=0.406/1.8=0.225g=225mg
奶油平均分子量=3*56*1000/225=224
結(jié)合膽紅素：膽紅素和血銀春液中鋒大耐的仿猛白蛋白結(jié)合后轉(zhuǎn)運到肝臟，在肝臟中與葡糖醛酸結(jié)合后生成葡糖醛酸膽紅素，叫結(jié)合膽紅素。
1.如果一個相對分子質(zhì)量為12000的蛋白質(zhì)，含10種氨基酸，并假設(shè)每種氨基酸在該蛋白質(zhì)分子中的數(shù)目相等，問這種蛋白質(zhì)有多少種可能的排列順序？[10100]
解：1012000/120=10100
2、有一個A肽，經(jīng)酸解分析得知為Lys、His、Asp、Glu2、Ala以及Val、Tyr和兩個NH3分子組成。當A肽與FDNB試劑反應(yīng)后得DNP-Asp；當用羧肽酶處理后得游離纈氨酸。如果我們在實驗中將A肽用胰蛋白酶降解時，得到兩種肽，其中一種（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在pH6.4時，凈電荷為零，另一種（His、Glu以及Val）可給除DNP-His，在pH6.4時，帶正電荷。此外，A肽用糜蛋白酶降解時，也得到兩種肽，其中一種（Asp、Ala、Tyr）在pH6.4時全中性，另一種（Lys、His、Glu2以及Val）在pH6.4時帶正電荷。問A肽的氨基酸序列如何？[Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val]
解：1、N-末端分析：FDNB法得：Asp-；
2、C-末端分析：羧肽酶法得：-Val；
3、胰蛋白酶只斷裂賴氨酸或精氨酸殘基的羧基形成的肽鍵，得到的是以Arg和Lys為C-末端殘基的肽斷。酸水解使Asn→Asp+ NH4+，由已知條件（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）可得：Asn-(
)-()-()-Lys-(
)-()-Val；
4、FDNB法分析N-末端得DNP-His，酸水解使Gln→Glu+NH4+由已知條件（His、Glu、Val）可得：Asn-()-()-( )-Lys-His-Gln-Val；
5、糜蛋白酶斷裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸殘基的羧基端肽鍵。由題，得到的一條肽（Asp、Ala、Tyr）結(jié)合（3）、（4）可得該肽的氨基酸序列為：Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val
3、某多肽的氨基酸序列如下：Glu-Val-Lys-Asn-Cys-Phe-Arg-Trp-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Glu-Ala-Thr-Cys-Arg-His-Met-Asp-Gln-Cys-Tyr-Pro-Gly-Glu_Glu-Lys。余告漏（1）如用胰蛋白酶處理，此多肽將產(chǎn)生幾個肽？并解釋原因（假設(shè)沒有二硫鍵存在）；（2）在pH7.5時，此多肽的凈電荷是多少單位？說明理由（假設(shè)pKa值：α-COOH4.0；α- NH3+6.0；Glu和Asp側(cè)鏈基4.0；Lys和Arg側(cè)鏈基11.0；His側(cè)鏈基7.5；Cys側(cè)鏈基9.0；Tyr側(cè)鏈基11.0）；（3）如何判斷此多肽是否含有二硫鍵？假如有二硫鍵存在，請設(shè)計實驗確定5，17和23位上的Cys哪兩個參與形成？[（1）4個肽；（2）-2.5單位；（3）如果多肽中無二硫鍵存在，經(jīng)胰蛋白酶水解后應(yīng)得4個肽段；如果存在一豎爛個二硫鍵應(yīng)得3個肽段并且個肽段所帶電荷不同，因此可用離子交換層析、電泳等方法將肽段分友旦開，鑒定出含二硫鍵的肽段，測定其氨基酸順序，便可確定二硫鍵的位置]
4、今有一個七肽，經(jīng)分析它的氨基酸組成是：Lys、Pro、Arg、Phe、Ala、Tyr和Ser。此肽未經(jīng)糜蛋白酶處理時，與FDNB反應(yīng)不產(chǎn)生α-DNP-氨基酸。經(jīng)糜蛋白酶作用后，此肽斷裂城兩個肽段，其氨基酸組成分別為Ala、Tyr、Ser和Pro、Phe、Lys、Arg。這兩個肽段分別與FDNB反應(yīng)，可分別產(chǎn)生DNP-Ser和DNP-Lys。此肽與胰蛋白酶反應(yīng)能生成兩個肽段，它們的氨基酸組成分別是Arg、Pro和Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala。試問此七肽的一級結(jié)構(gòu)怎樣？[它是一個環(huán)肽，序列為：-Phe-Ser-Ala-Tyr-Lys-Pro-Arg-]
解：（1）此肽未經(jīng)糜蛋白酶處理時，與FDNB反應(yīng)不產(chǎn)生α-DNP-氨基酸，說明此肽不含游離末端NH2，即此肽為一環(huán)肽；
（2）糜蛋白酶斷裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸殘基的羧基端肽鍵，由已知兩肽段氨基酸組成（Ala、Tyr、Ser和Pro、Phe、Lys、Arg）可得：-(
)-()-Tyr-和-()-()-(
)-Phe-；
（3）由（2）得的兩肽段分別與FDNB反應(yīng)，分別產(chǎn)生DNP-Ser和DNP-Lys可知該兩肽段的N-末端分別為-Ser-和-Lys-，結(jié)合（2）可得：-Ser-Ala-Tyr-和-Lys-()-( )-Phe-；
（4）胰蛋白酶專一斷裂Arg或Lys殘基的羧基參與形成的肽鍵，由題生成的兩肽段氨基酸組成（Arg、Pro和Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala）可得：-Pro-Arg-和-()-( )-()-()-Lys；
綜合（2）、（3）、（4）可得此肽一級結(jié)構(gòu)為：-Lys-Pro-Arg-Phe-Ser-Ala-Tyr-
5、三肽Lys- Lys- Lys的pI值必定大于它的任何一個個別基團的pKa值，這種說法是否正確？為什么？[正確，因為此三肽處于等電點時，七解離集團所處的狀態(tài)是C-末端COO-（pKa=3.0），N末端NH2（pKa≌8.0），3個側(cè)鏈3（1/3ε- NH3+）（pKa=10.53）,因此pI>最大的pKa值（10.53）]
6、一個多肽可還原為兩個肽段，它們的序列如下：鏈1為Ala-Cys-Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg- Arg-
Val-Cys；鏈2為Cys-Tyr-Cys-Phe-Cys。當用嗜熱菌蛋白酶消化原多肽（具有完整的二硫鍵）時可用下列各肽：（1）（Ala、Cys2、Val）；（2）（Arg、Lys、Phe、Pro）；（3）(Arg2、Cys2、Trp、Tyr)；（4）(Cys2、Phe)。試指出在該天然多肽中二硫鍵的位置。（結(jié)構(gòu)如下圖）
S-S
Ala-Cys-Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg-Arg-Val_Cys
S
S
Cys-Tyr-Cys-Phe-Cys
S-S
解：嗜熱菌蛋白酶作用專一性較差，根據(jù)題中已知條件：
（1）消化原多肽得到（Ala、Cys2、Val），說明鏈1在2位Cys 后及11位Val前發(fā)生斷裂，2位Cys與12位Cys之間有二硫鍵；
（2）由鏈1序列可得該肽段序列為：-Phe-Pro-Lys-Arg-；
（3）由（1）（2）可知該肽段(Arg2、Cys2、Trp、Tyr)中必有一Cys來自鏈2，另一Cys為鏈1中8位Cys，即鏈1中8位Cys與鏈2中的一個Cys有二硫鍵；
（4）嗜熱菌蛋白酶能水解Tyr、Phe等疏水氨基酸殘基，故此肽（Cys2、Phe）來自鏈2，結(jié)合（3）中含Tyr，可知（3）中形成的二硫鍵為鏈1 8位Cys與鏈2中3位Cys與鏈2中3位Cys之間；（4）中（Cys2、Phe）說明鏈2中1位Cys與5位Cys中有二硫鍵。
綜合（1）、（2）、（3）、（4）可得結(jié)果。
7、一個十肽的氨基酸分析表明其水解液中存在下列產(chǎn)物：
NH4+Asp Glu Tyr Arg
Met
Pro Lys Ser
Phe
并觀察下列事實：（1）用羧肽酶A和B處理該十肽無效；（2）胰蛋白酶處理產(chǎn)生兩個四肽和游離的Lys；（3）梭菌蛋白酶處理產(chǎn)生一個四肽和一個六肽；（4）溴化氫處理產(chǎn)生一個八肽和一個二肽，用單字母符號表示其序列為NP；（5）胰凝乳蛋白酶處理產(chǎn)生兩個三肽和一個四肽，N-末端的胰凝乳蛋白酶水解肽段在中性pH時攜帶-1凈電荷，在pH12時攜帶-3凈電荷；（6）一輪Edman降解給出下面的PTH衍生物：
寫出該十肽的氨基酸序列。[Ser-Glu-Tyr-Arg-Lys-Lys-Phe-Met-Asn-Pro]
解：（1）用羧肽酶A和B處理十肽無效說明該十肽C-末端殘基為-Pro；
（2）胰蛋白酶專一斷裂Lys或Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵，該十肽在胰蛋白酶處理后產(chǎn)生了兩個四肽和有利的Lys，說明十肽中含Lys-…或-Arg-…-Lys-Lys-…或-Arg-Lys-…-Lys-…Arg-Lys-…四種可能的肽段，且水解位置在4與5、5與6或4與5、8與9、9與10之間；
（3）梭菌蛋白酶專一裂解Arg殘基的羧基端肽鍵，處理該十肽后，產(chǎn)生一個四肽和一個六肽，則可知該十肽第四位為-Arg-；
（4）溴化氰只斷裂由Met殘基的羧基參加形成的肽鍵，處理該十肽后產(chǎn)生一個八肽和一個二肽，說明該十肽第八位或第二位為-Met-；用單字母表示二肽為NP，即-Asn-Pro-，故該十肽第八位為-Met-；
（5）胰凝乳蛋白酶斷裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸殘基的羧基端肽鍵，處理該十肽后，產(chǎn)生兩個三肽和一個四肽，說明該十肽第三位、第六位或第七位為Trp或Phe；
（6）一輪Edman降解分析N-末端，根據(jù)其反應(yīng)規(guī)律，可得N-末端氨基酸殘疾結(jié)構(gòu)式為：-NH-CH(-CH2OH)-C(=O)-，還原為-NH-CH(-CH2OH)-COOH-，可知此為Ser；
結(jié)合（1）、（2）、（3）、（4）、（5）、（6）可知該十肽的氨基酸序列為：
Ser-Glu-Tyr-Arg-Lys-Lys-Phe-Met-Asn-Pro
8、一個四肽，經(jīng)胰蛋白酶水解得兩個片段，一個片段在280nm附近有強的光吸收，并且Pauly反應(yīng)和坂口反應(yīng)（檢測胍基的）呈陽性。另一片段用溴化氰處理釋放出一個與茚三酮反應(yīng)呈黃色的氨基酸。寫出此四肽的氨基酸序列。[YRMP]
解：胰蛋白酶酶專一水解Lys和Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵，故該四肽中含Lys或Arg；一肽段在280nm附近有強光吸收且Pauly反應(yīng)和坂口反應(yīng)（檢測胍基的）呈陽性，說明該肽段含Tyr和Arg；溴化氰專一斷裂Met殘基的羧基參加形成的肽鍵，又因生成了與茚三酮反應(yīng)呈黃色的氨基酸，故該肽段為-Met-Pro-；所以該四肽的氨基酸組成為Tyr-Arg-Met-Pro，即YRMP。
9、蜂毒明肽（apamin）是存在蜜蜂毒液中的一個十八肽，其序列為CNCKAPETALCARRCQQH，已知蜂毒明肽形成二硫鍵，不與碘乙酸發(fā)生反應(yīng)，（1）問此肽中存在多少個二硫鍵？（2）請設(shè)計確定這些（個）二硫鍵位置的策略。
[（1）兩個；（2）二硫鍵的位置可能是1-3和11-15或1-11和3-15或1-15和3-11，第一種情況，用胰蛋白酶斷裂將產(chǎn)生兩個肽加Arg；第二種情況和第三種，將產(chǎn)生一個肽加Arg，通過二硫鍵部分氧化可以把后兩種情況區(qū)別開來。]
10、敘述用Mernfield固相化學(xué)方法合成二肽Lys-Ala。如果你打算向Lys-Ala加入一個亮氨酸殘基使成三肽，可能會掉進什么樣的“陷坑”？
解：（1）用BOC保護Ala氨基端，然后將其羧基掛接在樹脂上；
（2）除去N端保護，將用BOC保護的Arg用縮合劑DDC與Ala相連；
（3）將把樹脂懸浮在無水三氟乙酸中，通人干燥的HBr，使肽與樹脂脫離，同時保護基也被切除。
若打算向Lys-Ala加入一個亮氨酸殘基使成三肽，可能的坑為：Leu可能接在Arg的非α-氨基上。
6.膽紅素和血液中的白蛋白結(jié)合掘肆后轉(zhuǎn)運到判攜轎肝臟，在隱漏肝臟中與葡糖醛酸結(jié)合后生成葡糖醛酸膽紅素，叫結(jié)合膽紅素。
